Hallo Colm, vielen Dank, dass Du Dir erneut die Zeit für ein Interview nimmst. Kannst Du Dich und Dein Unternehmen Assay Genie zunächst kurz vorstellen? Wie hat alles angefangen?
Klar! Ich bin Dr. Colm Ryan, Mitbegründer und CEO von Assay Genie. Ich wurde im zarten Alter von 10 Jahren vom Unternehmergeist gepackt, als ich mein erstes Geschäft eröffnete - einen Süßwarenladen in der Bar meiner Eltern! Danach verliebte ich mich in die Geschäftswelt und gepaart mit meiner Leidenschaft für die Wissenschaft war es ein Traum von mir, ein Life-Science-Unternehmen zu gründen. Nachdem ich also meine Post-Doc-Forschung in Frankreich abgeschlossen und im Vertrieb und Marketing gearbeitet hatte, erkannte ich den Bedarf für eine neue Art von Assay-Unternehmen - eines, das Wissenschaftler durch innovative Produkte, originelles Marketing und tolle Interaktionen mit unserem Team zum Lächeln bringt! Im März 2017 öffneten wir zum ersten Mal unsere Türen und in den letzten 4 Jahren haben wir über 50.000 ELISAs, Antikörper, Assays und Proteine auf den Markt gebracht. Wir hatten das große Glück, Wissenschaftler von Boston bis Peking mit den Tools zu versorgen, die sie benötigen, um die Entdeckungen von morgen zu machen.
Nachdem wir nun über die Anfänge gesprochen haben, würde ich gerne mehr über Eure Pläne für die Zukunft erfahren. Im Januar 2021 habt Ihr eine neue Molekularbiologie-Produktlinie vorgestellt. Kannst Du erklären, welche Produkte Ihr entwickelt habt, um den Klonierungs-Workflow zu erleichtern?
Da wir uns leidenschaftlich dafür einsetzen, die Grenzen der Innovation zu erweitern, haben wir eine kleine Reihe sehr leistungsstarker Werkzeuge für die Genomforschung auf den Markt gebracht. Das Kraftpaket, das den Großteil dieser Technologie antreibt, ist unsere Genie Fusion Ultra High-Fidelity DNA Polymerase, die nach unserer Analyse eine x53-fach höhere Fidelität als herkömmliche Taq und damit eine höhere Fidelität als alle führenden Konkurrenten auf dem Markt aufweist. Dieses Enzym war für uns wegweisend und hat uns die Möglichkeit gegeben, unsere GenieClone Site-Directed Mutagenesis Kits zu entwickeln. Diese Kits können 2-5 diskontinuierliche Mutationen auf demselben Plasmid in ~3 Stunden erzeugen, indem sie die Leistung der Genie Fusion Ultra High-Fidelity DNA Polymerase mit unserem GenieClone DNA Assembly Cloning Kit kombinieren! Letzteres verwendet eine ligationsfreie, rekombinationsbasierte Technik, die das schnelle und nahtlose Klonieren eines beliebigen Fragments in einen beliebigen Vektor auf hocheffiziente Weise ermöglicht, ohne dass Restriktionsenzyme benötigt werden. Wenn man dies mit Genie Fusion koppelt und eine clevere Primer-Design-Strategie verwenden, hat man ein superstarkes Mutagenese-System. Außerdem haben wir auch ein TA/TOPO-Kit sowie MycoGenie Mycoplasma-Detektions- und Eliminierungskits auf den Markt gebracht, die voraussichtlich die Brücke zwischen Molekularbiologie und Zellbiologie bilden.
Aber Klonierungsprodukte sind ein umkämpfter Markt. Wie schneiden Ihr im Vergleich zu Ihren Konkurrenten ab?
Ja! Es ist ein sehr überfüllter Markt, wenn man nur an die traditionellen "Cut-and-Paste"-Klonierungstechnologien denkt. Unsere ligationsfreie, rekombinationsbasierte Technologie ermöglicht jedoch die schnelle und nahtlose Klonierung eines beliebigen Fragments in einen beliebigen Vektor auf hocheffiziente Weise, ohne dass Restriktionsenzyme benötigt werden. Eine weitverbreitete Alternative ist die Gibson-Assembly-Methode, aber wir haben große Fortschritte bei den Puffersystemen und Enzymen gemacht, um eine weitaus effizientere Methode zu entwickeln. Und, noch besser, zu einem Bruchteil der Kosten!
Abbildung: Die Amplifikationsgenauigkeit der Genie Fusion Ultra High-Fidelity DNA Polymerase ist 53-fach höher als die der Taq DNA Polymerase und 6-fach höher als die der Pfu, die anderen Produkten deutlich überlegen ist. Die Abbildung zeigt einen Vergleich der Amplifikationsgenauigkeit zwischen verschiedenen Polymerasen, die mit einem Lacl Assay bestimmt wurde.
Beeindruckend! Bessere Leistung zu einem niedrigeren Preis ist sicherlich ein überzeugendes Argument.
Und das ist es, was wir bei Assay Genie mit jedem Produkt, das wir anbieten, versuchen!
Ihr habt auch Kits für den Nachweis und die Eliminierung von Mykoplasmen entwickelt. Was sind Mykoplasmen und warum ist deren Detektion so wichtig?
Das ist eine ausgezeichnete Frage! Mykoplasmen sind eine Gattung von Bakterien. Der Hauptunterschied zwischen Mykoplasmen und anderen Bakterien ist das Fehlen einer Zellwand und einer flexiblen Membran. Die Größe von Mycoplasma-Bakterien beträgt typischerweise 0,15-0,3 µm. Ihre geringe Größe ist der Hauptgrund dafür, dass Mykoplasmen durch Filtersysteme in Zellkulturanlagen gelangen. Diese Organismen sind gegen die meisten Antibiotika resistent, die üblicherweise in Zellkulturen eingesetzt werden, wie z. B. Penicillin und Streptomycin. Mykoplasma-Tests sind erforderlich, um das Vorhandensein von Mykoplasma-Kontaminationen in biopharmazeutischen Laboratorien nachzuweisen. Die Mykoplasma-Kontamination ist eines der Hauptprobleme in der Zellkultur. Wenn sie unentdeckt bleibt, kann eine Mykoplasma-Kontamination erhebliche Auswirkungen auf die Qualität und Zuverlässigkeit Ihrer Zellkulturpräparate haben.
Kannst Du uns ein Beispiel nennen, bei dem eine Routinekontrolle empfehlenswert wäre?
Regelmäßige Mykoplasma-Tests und -Kontrollverfahren helfen, die kostspieligen Folgen einer Zellkulturkontamination zu vermeiden und sorgen für zuverlässige wissenschaftliche Ergebnisse.
Es gibt sehr viele verschiedene Mykoplasma-Arten. Gibt es Unterschiede in der Verteilung der Arten und erkennt Euer Kit alle Varianten?
Das MycoGenie Rapid Mycoplasma Detection Kit kann bis zu 28 Mykoplasma-Spezies nachweisen, darunter 8 der häufigsten Spezies, die mit Zellkulturkontaminationen in Verbindung gebracht werden. Es eignet sich für den Mykoplasma-Nachweis in einem breiten Spektrum von suspendierten und adhärenten Zellen, einschließlich CHO, Vero, Hybridoma, Sf9, HEK293 und vielen anderen.
Was ist der Vorteil des Mykoplasma-Detektionskits gegenüber einer PCR?
Das MycoGenie Rapid Mycoplasma Detection Kit verwendet die LAMP-Methode zum Nachweis von Mykoplasmen. Unser Kit bietet jedoch deutliche Vorteile gegenüber der herkömmlichen PCR. Unser Assay ist super einfach und enthält einen Puffer und ein Enzym, das nur eine einstündige Inkubation bei 60°C benötigt, um Mykoplasmen nachzuweisen. Das Beste daran: Wenn Mykoplasma vorhanden ist, entwickelt sich eine blaue Farbe, so dass man mit dem Auge prüfen kann, ob die Kultur kontaminiert ist. Dies steht im Vergleich zu mehreren Stunden Vorbereitung und Analyse für qPCR-Methoden.
Wie kann eine Mykoplasma-Kontamination verhindert werden und wie kann mich das Detektionskit dabei unterstützen?
Das ist ein schwieriges Thema! Wie die letzten Jahre gezeigt haben, kann man die Natur oft nicht kontrollieren. Allerdings sind sachgemäße, sterile Kultivierungstechniken der Schlüssel zum Erfolg. Als Absicherung gegen Kontaminationen haben wir uns entschlossen, ein MycoGenie MycoPlasma Elimination Kit auf den Markt zu bringen. Dieses Kit ermöglicht es Wissenschaftlern, Mykoplasmen aus Kulturen zu entfernen und dabei die Gesundheit der vorhandenen und wertvollen Zellen zu bewahren.
Vielen Dank für das Interview, Colm.
