Im Laboralltag kennt man die Herausforderung: Die Wahl des richtigen ELISA-Blockierungspuffers ist schwer, angesichts der wachsenden Zahl kommerziell erhältlicher Produkte und deren uneinheitlicher Performance. Bei der Wahl des richtigen Blockierungspuffers kommt es oft darauf an, die Faktoren für die ELISA-Plattenblockierung vollständig zu verstehen - insbesondere die beteiligten Stabilisierungsprozesse.
Wirkungsweise von Blockierungspuffern und Stabilisatoren
In der Regel werden die mit der Probe interagierenden Oberflächen der meisten Immunassays mit einem Blockierungspuffer behandelt. Dieser dient dem kurzfristigen Ziel, die Bereiche der Oberfläche abzudecken, die nicht von Antikörper- oder Antigenstrukturen besetzt sind. Er verhindert so, dass die Assay-Substanzen an die freien Bereiche binden. Zusätzlich stabilisiert das Blockierungsmittel die konstante Region der Antikörper. Dies geschieht ohne Beeinträchtigung der Antigenbindungsstellen. Erfordert der Assay eine langfristige Lagerung der Probe in getrocknetem Zustand, ist die Verwendung eines ELISA-Blockierungspuffers unerlässlich.
Eine universelle Lösung gibt es nicht
Die Entscheidung für einen Blockierungspuffer/Stabilisator hängt von der Zielsetzung ab. Im Folgenden sind vier verschiedene Szenarien und die empfohlene Wahl des Puffers aufgeführt.
- Überwachung der serologischen Werte eines entzündungsassoziierten Zytokins: Wir empfehlen ICTs General Block Buffer (BB1) bei der Entwicklung eines Sandwich-ELISAs. Alternativ können Sie den SynBlock Buffer (BB3) verwenden, wenn Sie eine proteinfreie Option benötigen.
- Verminderung unspezifischer Hintergrundsignale: Wir empfehlen den SynBlock Buffer (BB3), da diese Formulierung keine auf tierischem Protein basierenden Blockierungszusätze enthält. Es hat sich gezeigt, dass SynBlock Buffer (BB3) Probleme mit Hintergrundsignalen im Assay reduziert.
- Verwendung von Gelenkgewebeproben zur Entwicklung eines Antigen-Down-ELISA zur Überwachung serologischer Werte: Wir empfehlen den Neptune Block Buffer (BB2), der ein heterogenes Gemisch von Nicht-Säuger-Proteinen enthält. Neptune Block Buffer (BB2) minimiert nachweislich unspezifische Bindungsinteraktionen.
- Entwicklung eines Sandwich-ELISA zur Erhöhung der Assaysensitivität unter Verwendung eines Avidin-HRP mit Biotin-Signalverstärkung: Wir empfehlen den Neptune Block Buffer (BB2). Er kann dazu beitragen, die unspezifische Bindung zu reduzieren, die auftreten kann, wenn IgG-Moleküle aufgrund von Biotin "klebrig" werden.
Erfolgreiche Entwicklungsprozesse für Enzymimmunassays (EIA) oder ELISA-Formate erfordern die entsprechende Blockierung von Antigen- oder Antikörperplatten. Dies beginnt mit der Auswahl der effektivsten und effizientesten Lösung.
ImmunoChemistry Technologies bietet derzeit eine Vielzahl von Blockierungspuffern an, einschließlich eines Optimierungspakets mit fünf 100 ml Flaschen der verschiedenen Blockiierungspuffer-Formulierungen (General Block, Neptune Block, SynBlock, Alternative Block und Monster Block) für einen wirtschaftlichen Ansatz beim Screening nach dem besten Blockierungspuffer für einen ELISA.
